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　　ELISA實(shí)驗(yàn)：ELISA樣本收集處理方法

　　以下是ELISA實(shí)驗(yàn)中不同樣本類(lèi)型的收集與處理方法，結(jié)合實(shí)驗(yàn)規(guī)范與關(guān)鍵注意事項(xiàng)進(jìn)行系統(tǒng)整理：

　　一、血清樣本處理

　　采集要求?

　　使用無(wú)熱源、無(wú)內(nèi)毒素的試管采集血液，室溫靜置2小時(shí)或4℃過(guò)夜使血清析出，傾斜放置可增加析出效率?。

　　4℃條件下1000×g離心20分鐘，避免溶血(紅細(xì)胞裂解會(huì)釋放過(guò)氧化物酶干擾HRP標(biāo)記檢測(cè))?。

　　保存方法?

　　分裝后-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。溶血或高血脂樣本需棄用?。

　　二、血漿樣本處理

　　抗凝劑選擇?

　　采用EDTA或肝素鈉抗凝管采集血液，30分鐘內(nèi)4℃ 1000×g離心15分鐘取上清?。

　　需核對(duì)試劑說(shuō)明書(shū)，部分檢測(cè)對(duì)抗凝劑類(lèi)型有特殊要求(如避免肝素干擾某些抗體結(jié)合)?。

　　存儲(chǔ)注意事項(xiàng)?

　　分裝冷凍保存，避免室溫長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致凝血因子降解?。

　　三、細(xì)胞培養(yǎng)上清處理

　　預(yù)處理步驟?

　　收集上清后需兩次離心：1000×g離心20分鐘去除細(xì)胞碎片，第二次13000×g離心10分鐘確保雜質(zhì)清除?。

　　酸化中和處理：100μL樣本加20μL 1N HCl孵育10分鐘，再用20μL 1.2N NaOH/0.5M HEPES中和?。

　　質(zhì)量控制?

　　建議BCA法測(cè)定總蛋白濃度，確保樣本一致性?。

　　四、組織樣本處理

　　勻漿制備?

　　冰上操作：按10mg組織加入100-200μL裂解液，勻漿后4℃靜置20分鐘?。

　　離心條件：13000×g離心10分鐘取上清，重復(fù)離心可提高純度?。

　　緩沖液選擇?

　　推薦0.05mol/L Tris或磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)維持等滲環(huán)境?。

　　五、通用注意事項(xiàng)

　　防污染措施?

　　使用一次性耗材，加樣時(shí)更換槍頭，避免交叉污染?。

　　操作分區(qū)：加樣、孵育、洗滌區(qū)域分離，高濃度樣本最后處理?。

　　穩(wěn)定性控制?

　　凍存樣本需緩慢解凍(2-8℃ 30分鐘以上)，避免直接室溫解凍導(dǎo)致蛋白變性?。

　　通過(guò)規(guī)范化的樣本處理流程，可顯著提升ELISA檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性?。

　　注：以上資料僅供參考，具體產(chǎn)品請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或是品牌供應(yīng)商。

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